利用Biacore 检测FcRn 受体与IgG 结合的动力学数据ka、kd 及亲和力数据KD。受体FcRn 分子量为43.5KD，商业化蛋白带有His 标签；IgG 分子量为150KD。本实验利用NTA 芯片捕获FcRn，IgG 分子作为分析物检测FcRn 与IgG 结合的动力学数据和亲和力数据。

一、实验使用机型、试剂和耗材

1、本实验所用的机型为：Biacore T200。

2、芯片：NTA 芯片及试剂盒，购自GE Healthcare。

3、缓冲液：10 × PBS-P + pH 7.4，购自GE Healthcare。

4、去离子水（用0.22uM 膜过滤过）。

5、配体FcRn：如果为商业化蛋白粉末，用水稀释到100ug/ml 或200ug/ml，分装在-20°C保存。推荐使用：Sinobio，用前确认FcRn的活性。

6、IgG ：母液IgG浓度至少在1.5 mg/ml，样品体积在200 ul以上，纯度>90%（即跑SDS-PAGE 胶有两条带）。如果IgG 中的盐离子浓度或多糖浓度过高可进行脱盐。

7、其他耗材：无盖1.5ml EP管，96 孔板、2型橡胶盖、96 孔板封口膜，购买地均为GE Healthcare。

二、实验步骤

（一）开机

操作视频

（二）样品稀释

本次实验以一个FcRn 和两个抗体的相互作用为例。

1、运行缓冲液：如果缓冲液用的是10 × PBS-P + pH7.4 稀释为1 × PBS-P + 并将pH 调到6.0，至少配置500ml 的运行缓冲液。根据实验不同调整缓冲液的配置量。

2、配体FcRn 浓度：用运行缓冲液将配体溶液稀释至0.5ug/ml，800ul。

3、IgG 浓度：实验中用运行缓冲液将IgG 浓度分别稀释为：3.0uM，1.5uM，0.75uM,0.325uM，0.165uM，0uM。

（三）配体偶联量的调试

本实验采用的配体偶联为捕获偶联的程序偶联法，偶联程序和样品测试程序在一起。在运行程序之前需要进行配体偶联量的调试工作。调试工作采用手动运行的模式进行。

（四）配体偶联及样品检测

配体偶联量调试和配体偶联以及样品检测视频

（五）数据分析

本实验采用动力学分析。（操作视频）

（六）关机

操作视频