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ITC案例分析

2020-10-06  点击:[]


使用ITC测定环糊精与硫酸对甲酚的结合常数


环糊精和硫酸对甲酚的相互作用符合常规的主客体作用模式。

环糊精是一类中空杯装的分子,其特殊的构型使得其外侧具有亲水性,同时内部为疏水环境。由于硫酸对甲酚具有疏水性的芳香环结构,在水溶液中,芳香环结构更倾向于进入疏水的环糊精空腔中,形成稳定的复合物。

 

样品的准备:

精确称量环糊精,将其溶于5 mL水中,超声分散30 min;

精确称量硫酸对甲酚,将其分散于5 mL水中,超声分散30 min;

准备约100 mL超纯水,过膜,用于清洗ITC设备;

将环糊精和硫酸对甲酚溶液分别通过针头滤器(0.22 um)过滤,除去不溶的固体颗粒

 

反应条件:

 

Total & Injections:20

 

Cell Temperature(0C.):25

 

Reference Power(µcal/sec.):10

 

Initial Delay (sec.):60

 

Syringe Concentration (mM):0.1

 

Cell Concentration (mM):0.01

 

Stirring Speed (RPM):1000

 

Injection Parameters

 

Volume

Duration

Spacing

Filter

1

0.5

1

150

1

2

2

4

150

1

3

2

4

150

1

4

2

4

150

1

5

2

4

150

1

6

2

4

150

1

7

2

4

150

1

8

2

4

150

1

9

2

4

150

1

10

2

4

150

1

11

2

4

150

1

12

2

4

150

1

13

2

4

150

1

14

2

4

150

1

15

2

4

150

1

16

2

4

150

1

17

2

4

150

1

18

2

4

150

1

19

2

4

150

1

20

2

4

150

1

 

 

 

实验结果:

 

注意事项:

注射器中样品浓度可设为样品池中浓度的10倍,并非强制要求,可以按照实际情况具体调整;

由于ITC所需样品很少,而称量样品时,天平存在一个固定的误差,因而称量样品越多,最终获得的样品浓度越可靠,因而样品称取时建议配置成母液,在使用时稀释至工作浓度;

ITC主要测定的是作用过程的吸放热,因而在正式试验之前建议进行预实验摸索最佳的实验浓度,进而提高实验的成功率与准确性;

实例中的水并不是强制要求,使用buffer应针对不同的实验,合理选择;

同时不同溶剂在彼此滴定的过程中可能存在放热的现象,因而溶解主客体溶质的时候尽可能使用同一批次的同一种buffer,若操作中无法实现使用相同的buffer,则可以考虑增加只含有buffer的空白滴定,在后期扣除背景;

 

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