1.等温滴定热分析技术的概念:
等温滴定热分析技术(ITC):用于量化研究各种生物分子相互作用的一种技术。 它可直接测量生物分子结合过程中释放或吸收的热量。
2.为什么可以用微量热法研究分子间相互作用?
(1)分子间相互作用过程中价键的形成和破坏需要释放或者吸收能量
(2)绝大部分化学和生化过程都伴随着热量的吸收和释放
(3)微量热检测的是最基本、最普遍的物理量-热量变化
(4)仪器灵敏度的提高让检测mcal或者ncal水平的热量成为可能
(5)样品的用量也随着仪器设计的进步而减少到可以接受的程度
(6)被分析的样品始终处于天然的溶液状态和构象,无需修饰
(7)非光学检测,样品颜色、内在荧光、透明度不对实验有影响
(8)热量测定可以在广泛的溶液环境和温度条件下
3.ITC的优势和特点:
(1)无需标记,直接测定最普遍的热量变化,进行分子结合的确认和分析,开展酶学动力学研究
(2)检测溶液中的天然分子,亲和力范围从10-2M~10-12M
(3)提供丰富的信息,通过测量结合过程中的热传递,能够准确地确定结合常数(K)、反应化学量(n)、焓(∆H)和熵(ΔS)
(4)使用方便,无需通过荧光标记或固定化技术对结合配偶体进行修饰,操作简单,2小时内即可得到结果,几乎没有耗材。
4.ITC工作原理:
在设定的恒定反应温度下,样品池中的大分子蛋白与滴定注射器中的配体发生反应释放出热量(或者吸收热量),校准加热器为了维持样品池和参照池之间的温差为零所测得的两者之间的功率差异。
5.ITC的应用: