使用BIACORE ProteinA芯片检测抗体与抗原结合的动力学ka、kd和亲和力数据KD。本实验使用的抗体为抗人源B2微球蛋白的鼠单抗,分子量约为150KD;抗原为人源B2微球蛋白,分子量为11.8KD。本实验采用Protein A芯片以捕获法的方式固定抗体,抗原作为分析物检测其余抗体结合的动力学和亲和力数据。
一、实验使用机型、试剂盒耗材
1、本实验所用的机型:Biacore T200。
2、使用芯片:Protein A芯片。Protein A芯片可以捕获许多哺乳动物源的抗体,包括人源IgG1、IgG2、IgG4等。只结合抗体Fc区重链,不结合抗体Fab段,保证了抗体结合的定向性。购自GE Healthcare。
3、缓冲液:10 × PBS-P +,购自GE Healthcare。
4、去离子水(用0.22μm 膜过滤过)。
5、配体:抗人源B2微球蛋白的鼠单抗,母液浓度为1mg/ml。
6、分析物:人源B2微球蛋白,母液浓度为85μM。
7、其他耗材:无盖1.5ml EP管,96孔板,购自GE Healthcare。