一、操作面板说明
按OK进入子菜单；按ESC退到上级菜单；按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。
停止程序或方法运行。
分布收集器前进一管。
梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一下，继续梯度运行。
按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再按一下，继续。
二、实验准备
1、纯净水、20%乙醇、缓冲液A/B：过0.45 u的膜，超声脱气75功率10－15min，用大试剂瓶装好；注意最好是现用现配，如头一天配置好在冰箱中过夜的使用前缓和到室温。
2、样品：过0.45 u的膜；/3、柱子：根据实验选择合适的柱子（分子筛、离子交换、镍柱、疏水柱等）
三、操作说明
1、开机
将蛋白层析以后面电源开关打开，打开电脑，
点击电脑上图标
，打开PrimeView软件。
4、将缓冲液A路、B路的管子沉头用洗瓶冲洗干净放入纯净水瓶中。
5、抽气：将泵上的堵头拧下，用特制的抽气针管抽气。注意：此时抽取的是A路。
B路抽气方法：
按“下箭头”到屏幕显示“Manual Run”时按“OK”进入手动操作，
按“下箭头”到显示“Set Concentration %B”设置B路起始浓度，按“OK”然后按“上箭头”到数值显示为100，按“OK”。将B路起始浓度设置为100。
按下箭头到屏幕显示“Set Flow Rate”,按“OK”设置流速，按上箭头到数值显示为0.1，按“OK”确认。
按下箭头到到屏幕显示“Set Pressure Limit”，按“OK”设置压力保护，按下箭头到数值显示为0.3（注意：一般层析柱承受的压力极限为0.3MP，可根据实际使用柱子的压力极限设置。当光路压力超过设置的眼里极限时，系统会自动报警并且泵会停止运行，起到保护层析柱的作用。）
按下箭头到屏幕显示“Start Run”，按“OK”开始。
将泵上的堵头拧下，用特制的抽气针管抽气。
6、连接层析柱
将层析柱的上方堵头拧开，同时在机器有流速的情况下将紫外检测器上方的接头拧开，用管路中滴出的水将层析柱上方连接处滴满，然后将机器管路接头和层析柱上方接头连接，注意不要拧紧，然后将层析柱下方堵头拧松，接着将机器管路接头和层析柱上方接头拧紧。拧去层析柱下方堵头，用下方接头处滴出的水将紫外检测器上方连接处滴满，然后将层析柱下方接头和紫外检测器上方的接口连接拧紧。
注意：操作过程中必然会有液体滴漏溢出在紫外检测器上面，请及时擦拭干净。避免液体渗入到紫外检测器里损坏紫外检测器中的光学元件。
7、用纯净水冲洗管路和柱子。
按“下箭头”到显示“Set Concentration %B”设置B路起始浓度，按“OK”然后按“上箭头”到数值显示为50，按“OK”。将B路起始浓度设置为50。
按下箭头到屏幕显示“Set Flow Rate”,按“OK”设置流速，按上箭头增加流速，按“OK”确认。增加到层析柱能承受的流速（不超过柱子极限压力即可）。注意：增加流速应缓慢逐次增加。
一般冲洗柱子2倍柱体积，直到电脑软件中紫外检测线（基线）水平平稳。
6、平衡层析柱
将缓冲液A路的管子沉头放入缓冲液A试剂瓶中；B路的管子沉头放入缓冲液B试剂瓶中，A/B分别按步骤4抽气。注意：分子筛层析不需要B路。
按下箭头在“Set Concentration %B”设置B路起始浓度为0%，在“Set Flow Rate”设置适当流速，用缓冲液A冲洗管路及平衡层析柱，观察电脑软件中紫外吸收基线、电导变化趋势，等待基线不变时即可上样。注意：一般平衡5倍柱体积。
此时可将紫外归零：按下箭头到显示“Autozero”,按“OK”后紫外吸收检测自动归零。
7、上样
按照样品体积选择合适的上样环，将样品用针管吸取样品，去掉注射针头，安在上样阀的3号口上。将样品推入上样环中。
按下箭头到“Set Inject Valve Pos”,按“OK”进入，按上或下箭头选择inject，按“OK”后上样阀切换到inject模式，缓冲液推动上样环中的样品进入层析柱。
8、挂柱
观察电脑软件中紫外吸收检测值，当其向上扬起时拿试管收集从废液口流出的样品，当紫外吸收检测值回到基线时停止收集。此紫外吸收峰为穿透峰，（即收集到的蛋白为没有结合到层析柱填料上，穿透而过。注意：初次试验时穿透峰也应收集，检测其中是否含有目的蛋白。）直到不再有峰出现即可开始洗脱。注意：分子筛层析直接跳到步骤12。
9、洗脱
用适当的洗脱液将附着在层析柱上的蛋白组分根据结合的牢固程度一次洗脱下来的过程极为洗脱。一般有连续梯度洗脱和阶梯梯度洗脱。
1）连续梯度洗脱
按下箭头到“Set Gradient”，按“OK”进入，在“Set Length”按“OK”,按上箭头设置洗脱体积，按“OK”到“Set Target”，按“OK”，按上箭头设置洗脱结束时缓冲液B所占的百分比。按“OK”完成连续梯度洗脱设置。
2）阶梯梯度洗脱
按“下箭头”到显示“Set Concentration %B”设置B路起始浓度，按“OK”然后按“上箭头”设置第一洗脱浓度（具体数值应根据实验摸索条件），按“OK”。洗脱过程需要观察电脑软件中的紫外吸收检测值收集样品。洗脱一定体积后重复上述设置提高洗脱浓度B%。以此类推。
10、收集
1）手动收集
观察电脑软件中紫外吸收检测值，当其向上扬起时拿试管收集从废液口流出的样品，当紫外吸收检测值回到基线时停止收集。以此类推。
2）自动收集
在自动收集器中放入收集管。将自动收集器的臂根部向上抬起
，自动收集器的臂回弹，让臂上的白色卡片上的箭头
顶住收集管。将自动收集盘后面的传动轴
向外搬出，转动自动收集盘使得臂上的白色卡片上的箭头定在第一个收集管上。
如图将自动收集管路出口插到臂上的银色孔处
。将绿色自动收集管路向下顶，然后拔出黑色接头插入到自动收集器臂上的
处。
按下箭头到“Set Fraction Base”设置收集模式，有体积、时间、滴三种模式选择。选择一种模式按“OK”。
按下箭头到“Set Fraction Size”设置收集步长，按上箭头到设定数值后按“OK”确定即可开始自动收集。实验结束后可根据电脑软件中紫外吸收峰归并收集的样品。
11、层析柱再生
使用强洗脱液对柱子进行再生。保证柱子上不在有蛋白结合。
分子筛层析可跳过此步骤
12、纯净水冲洗管路及柱子
将缓冲液A路、B路的管子沉头用洗瓶冲洗干净放入纯净水瓶中后抽气，抽气见步骤5。
冲洗过程参照步骤7.
13、20%乙醇冲洗管路及柱子
将缓冲液A路、B路的管子沉头用洗瓶冲洗干净放入20%乙醇溶液瓶中后抽气，抽气见步骤5。
冲洗过程参照步骤7。
14、结束实验
按下“End”后系统提示是否结束，选择“Yes”后按下“OK”确认，系统提示是否打印，选择“No”按下“OK”确认。机器结束运行。运行结果自动保存到电脑硬盘中，在电脑硬盘中找到改文件后修改名字后拷贝备份。
15、将仪器背后开关关闭，将电脑软件关闭。即可。
二、数据处理
打开电脑软件PrimeView Evaluation
。
